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人非小细胞肺癌细胞A549的传代及冻存方法

更新时间:2022-12-06 点击量:949
  人非小细胞肺癌细胞A549能通过胞苷二磷脂酰胆碱途径合成富含不饱和脂肪酸的卵磷脂;角蛋白阳性。肺癌是常见的恶性肿瘤之一,已成为我国城市人口恶性肿瘤死亡原因的第1位。非小细胞型肺癌包括鳞状细胞癌(鳞癌)、腺癌、大细胞癌,与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢,扩散转移相对较晚。非小细胞肺癌约占所有肺癌的80%,约75%的患者发现时已处于中晚期,5年生存率很低。
  
  人非小细胞肺癌细胞A549的传代方法:
  
  1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  
  2、加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000rpm离心5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
  
  3、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
  
  人非小细胞肺癌细胞A549的冻存方法:
  
  1、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000rpm条件下离心4min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,加1mL血清重悬细胞,进行细胞计数。
  
  2、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
  
  3、将冻存管放入-80℃冰箱,24h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。