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人非小细胞肺癌细胞A549实验前后分别要注意哪些事情

更新时间:2023-03-17 点击量:773
  1)冻存细胞的复苏:
  将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
  2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
  对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
  3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
  人非小细胞肺癌细胞A549使用注意事项
  1.实验前应检查细胞的稳定性,确保细胞的纯度和活性。
  2.实验中应使用无菌技术,以避免外界污染对实验结果的影响。
  3.使用培养基时应严格按照厂家说明书的要求制备,保证培养基的质量。
  4.A549细胞应在体外培养,并在合适的温度(37℃)和湿度(5%CO2含量)下进行实验。
  5.建议使用合适的细胞培养基,例如DMEM/F12,RPMI1640等。
  6.需要注意细胞的传代,细胞传代时必须在适当的细胞密度下移植细胞,以避免过度生长和细胞间的相互作用。
  7.确保试剂的稳定性和储存条件,以保证实验的准确性和重复性。
  8.需要预先准备药物浓度和时间等相关信息,以确保实验的可重复性和较好的控制。
  9.进行实验时应尽量减少操作时间,以避免对细胞活性的影响。
  10.应尽可能避免使用有毒物质及危险试剂,保证实验的安全性。