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人表皮癌细胞A-431的正确操作步骤

更新时间:2022-11-27 点击量:330
   人表皮癌细胞A-431在抗胸腺细胞球蛋白、血清处理的NIH瑞士小鼠中形成类似于恶性黑素瘤的快速增长的皮下肿瘤,在普通成纤维细胞和琼脂上形成克隆。这是一个超三倍体人细胞株。
  
  人表皮癌细胞A-431操作步骤:
  
  1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
  
  2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
  
  3.在距离紫外灯直射范围内20-30厘米处照射2-3小时;
  
  4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
  
  5.将培养板在5%CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
  
  人表皮癌细胞A-431培养方法如下:
  
  1、将细胞稀释到1000个细胞/mL,接种到24孔板,每孔1ml。
  
  2、接种后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选。
  
  3、每隔3天跟换1次培养液,保持G418浓度不变。
  
  4、选择出在10~14天内使全部死亡的G418浓度来进行下一步的筛选试验。由于每种细胞对G418的敏感性不同,一般变动在100ug/ml~1000ug/ml范围。