HepG2人肝癌细胞

基本培养条件:

培养基：90％DMEM +10％胎牛血清

温度：         37℃

         气相：95％空气，5%二氧化碳

2.细胞运输：

本细胞为贴壁细胞，常规运输方式是将细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满新鲜的培养液并封好瓶口进行运输。

根据气温的高低及运输距离的远近，我们可能采取以下两种方式运输。

活细胞YM消化离心后血清发货；

冻存管发货。

3.客户收到细胞后请严格按照以下要求进行操作。

3.1培养前的注意事项：
A. 细胞出库前都是生长良好,我们会对出库细胞进行拍照留档(建议用户在收到细胞时拍照片,细胞拍照时请用100X 、200X倍数各拍上2~3张照片留存,可用作细胞状态的对比,拍摄的照片应当清晰)。

B. 用户在收到细胞后,先观察培养瓶是否完好,培养液是否外渗,培养液是否浑浊。

3.2新购细胞的初步培养：

客户收到细胞后在未开封前,先用75％酒精将培养瓶外表擦拭干净,镜检细胞贴壁情况。将细胞置于培养箱中进行1-2小时的缓冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续细胞实验。

细胞恢复基本生长状态后，倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

A. 细胞密度未达85％时，用75％酒精喷洒培养瓶后放在生物操作台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸取剩余培养液，只留6~8ml培养液继续培养。

B.细胞长满（达85-95％），即可进行传代。

3.3细胞培养：

A.细胞密度未达85％时，5~8ml培养液继续培养。

B.培养基营养耗尽时，需及时换新鲜培养基；

C.细胞长满（达85-95％），即可进行传代。

传代参考步骤如下：

a.弃去培养液，用无钙镁D-PBS洗涤1-2次

对于T25培养瓶来说，加入2-3ml 0.25%的YM-EDTA消化液，置b.37℃消化，并不时用显微镜观察细胞消化情况，如细胞回锁变圆、透亮、轻拍瓶壁呈流沙样脱落，则迅速回操作台，加入6-8ml含10％血清的培养液，终止消化并轻轻吹打细胞，使其变成单细胞悬液。

将细胞收集于离心管中以c. 80g-120g离心力离心2-5min，弃上清 , 轻弹管底 , 将细胞混悬于残留上清中。

d.加入新鲜培养液重悬细胞，进行传代、冻存；

e.如果没有特别说明，收到的细胞第一次传代比例为1:2，后期可按1：4-1：6的比例传代。

3.4细胞观察：

A、观察细胞密度做好用（4X物镜）低倍镜观察，以便正确的判断细胞密度细胞。

B、观察细胞形态请用（10X或20X）高倍镜观察。

3.5细胞保存：

冻存配方：70％基础培养液+20％胎牛血清+10％DMSO

保存条件：液氮保存

3.6注意事项：

A、瓶中运输的培养液我们建议保留培养一代后，传代后分别用客户自己的培养基和运输培养基分别培养一瓶。以防止细胞不适应客户自用的培养基而造成状态不好或细胞死亡。

B、如发现细胞贴壁不牢，有少量脱落，可离心运输用培养基，将细胞离心下来，混悬后接种到原瓶内；