Calu-3人肺腺癌细胞(胸水)Calu-3人肺腺癌细胞(胸水)
种属：人；贴壁生长；生长周期：3~4天
收货处理方法:
贴壁生长的细胞:
1、贴壁生长的细胞用T25细胞培养瓶发货,收到细胞后,拆开包装T25瓶的自封袋,不拆封口膜,表面喷75%酒精消毒。
2、消毒后用显微镜观察细胞状态,并拍下细胞照片。
3、将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上,平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境。
4、平衡后将T25瓶中培养基吸出用离心管装好备用。
5、如细胞密度高于80%,可以直接消化传代,相反则加入5-6mL培养基放回培养箱继续培养即可。
悬浮生长的细胞:
1、悬浮细胞发货复苏后用离心管发货,拆开包装离心管的自封袋,不拆封口膜,表面喷75%酒精消毒。
2、然后用显微镜观察细胞状态。
3、将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上。
4、平衡完成后,离心(1000rpm,3min)收集细胞,弃上清。
5、用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中,放回培养箱继续培养。
培养步骤：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消
3.轻轻吹打细胞，脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法三：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
1）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量YM，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。
