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Ishikawa人子宫内膜癌细胞

Ishikawa人子宫内膜癌细胞

简要描述:Ishikawa人子宫内膜癌细胞
种属来源:人

组织来源:子宫

细胞形态:上皮细胞样

生长特性:贴壁生长

产品型号: RIshikawa

所属分类:细胞库

更新时间:2023-11-01

详细说明:

Ishikawa人子宫内膜癌细胞

Ishikawa人子宫内膜癌细胞

培养基::MEM+15% FBS+1%NEAA+PS

生长条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃

传代方法:1:2至1:3,每周 3次

冻存条件:无血清冻存液,液氮储存

支原体检测:无

细胞培养操作

1)复苏细胞:将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml*培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,加 1 mL血清重悬细胞,进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,干冰运输的细胞检查干冰是否*挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片,是正常现象。.观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。

4. 贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900 rpm-1000 rpm离心3 min,弃上清。加5 mL PBS重悬细胞,再900 rpm-1000 rpm离心3 min,,用新鲜的*培养基重悬细胞,并接种到新的培养瓶或培养皿中,置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议1:2传代 。

9. 注意: 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。





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