PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞
PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞
当密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞，在超净台中将要冻存的细胞移入离心管，1000rpm离心5min，弃上清，用90%培养液+10%DMSO的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为4-6×106/ml，将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管)。
含量：>1x106 个/mL， 规格：T75瓶或者1mL冻存管包装
培养基：RPMI-1640(GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度。
生长特性：贴壁生长
污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
传代操作步骤：
一、贴壁细胞传代
1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。
3.加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。
4.用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。
5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
二、悬浮细胞传代
1.将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。
2.弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。
3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。
