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人纤维肉瘤细胞HT-1080应当如何培养?

更新时间:2023-01-03 点击量:416
  人纤维肉瘤细胞HT-1080的形态学观察及鉴定:细胞换液后直接在倒置显微镜下观察细胞的形态及生长特征,并作相差摄影,同时进行常规HE染色观察并摄片。鉴定采用DAB免疫组织化学法,在6孔培养板中放置载玻片,在玻片上植入2ml含有1×106的细胞悬液,待细胞贴壁后,取出载玻片,放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS冲洗3次,每次2min,滴加3%H2O2室温孵育10min,PBS冲洗3次,每次2min,以消除内源性过氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相关抗原多抗工作液,放入湿盒内4℃过夜,同时另一盖玻片不加一抗作阴性对照。次日,用PBS冲洗3次,每次2min,滴加辣根酶标记的羊抗兔IgG,37℃孵育30min,用PBS冲洗3次,每次2min,用DAB底物混合工作液显色,显微镜下观察,待出现特异性染色后,终止显色,进行复染,脱水,透明,封片,相差显微镜下观察摄影。
  
  人纤维肉瘤细胞HT-1080的培养:
  
  1.取出小鼠后沥干酒精,放入超净台内,固定在泡沫板上。
  
  2.用镊子提起皮肤,用解剖剪剪开皮肤一个横切口,将皮肤向上撕开,然后剪开肌肉等,暴露出腹腔,在左侧找到脾脏,用弯头YK镊取出脾脏,置于无菌培养皿中。
  
  3.用生理盐水将取出的脾脏清洗多次,并剔除多余无用的组织。
  
  4.将筛网置于平皿中,脾脏置于筛网上,用弯头镊镊住,轻轻在筛网上进行碾磨,同时不停滴加不含血清的培养液冲洗。
  
  5.将碾磨好的细胞悬液吸入至离心管中,离心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。
  
  6.加入10ml培养液,吹打混匀,取样计数。
  
  7.将稀释好的细胞悬液分装于培养瓶中,轻轻摇晃混匀,在培养瓶上。