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人子宫颈鳞癌细胞SiHa贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项

更新时间:2023-02-07 点击量:358
  人子宫颈鳞癌细胞SiHa贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项:
  
  1.收到细胞当天尽快更换新鲜培养基,第二天再进行消化处理
  
  2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的培养基,培养观察
  
  3.若出现生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养
  
  人子宫颈鳞癌细胞SiHa贴壁细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作):
  
  1.吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加适量0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间)
  
  2.镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散
  
  3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养
  
  4.注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项作或者冻存
  
  人子宫颈鳞癌细胞SiHa的传代方法:
  
  1.尽量吸干净T25瓶原培养基;
  
  2.加3-4ml常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS;
  
  3.T25瓶加1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层;
  
  4.将培养瓶放入37度培养箱消化;
  
  5.消化到细胞间隙变大,但未脱落时加2-3ml培养基终止胰酶消化;
  
  6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清;
  
  7.加新的培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里;
  
  8.补足培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养;