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人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299冻存方法

更新时间:2023-01-22 点击量:348
  人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299在培养瓶中培养至良好状态后灌满培养液并封好瓶口是细胞运输的好办法。收到细胞回到自己的实验室后,先打开外包装,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内,严格无菌操作,培养箱静置2-4小时。镜下观察:未超过80%汇合度时,可将瓶装的培养液收集至离心管中,加入6ml*培养基,放入37℃、5%CO2孵箱培养;超过80%汇合度时,根据情况传代或者冻存,具体操作见细胞培养步骤。(注意发货的是密封培养瓶的话,放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松)
  
  人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
  
  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  
  2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
  
  3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
  
  4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
  
  人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299细胞冻存待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量MY,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。