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人乳腺癌细胞MCF-7的培养步骤及冻存方式

更新时间:2023-02-12 点击量:929
  人乳腺癌细胞MCF-7保留了分化乳腺上皮的许多特性。包括:能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成圆形复合物(domes)。该细胞含有WNT7B癌基因。肿瘤坏死因子α(TNFalpha)可以抑制MCF-7细胞生长。细胞经抗雌激素处理后能调节胰岛素样生长因子结合蛋白IGFBPS分泌。
  
  人乳腺癌细胞MCF-7培养步骤:
  
  1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
  
  2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
  
  对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
  
  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  
  2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。
  
  3.轻轻吹打细胞,脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
  
  4.按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。
  
  人乳腺癌细胞MCF-7细胞冻存:(注:非无血清冻存液方法,无血清冻存液方法请参考我司货号:C7001)
  
  1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
  
  2、添加0.25%YDBM消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
  
  3、用适量的冻存液重悬细胞,并放置于冻存管中;
  
  4、先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h,然后将其移入-80℃。