IPEC-J2猪小肠上皮细胞
IPEC-J2猪小肠上皮细胞
密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞，在超净台中将要冻存的细胞移入离心管，1000rpm离心5min，弃上清，用90%培养液+10%DMSO的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为4-6×106/ml，将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管)。
含量：>1x106 个/mL， 规格：T75瓶或者1mL冻存管包装
培养基：90%高糖DMEM+10%FBS
生长特性：贴壁生长
污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
传代操作步骤：
一、贴壁细胞传代
1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。
3.加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。
4.用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。
5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
二、悬浮细胞传代
1.将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。
2.弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。
3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。
培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，这种情况是怎么引起的呢？该怎么避免呢？原因：
黑点，大概有细胞本身带的，环境有的，还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基
1、如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；
2、如果小黑点没有增殖趋势，且不影响细胞生长，也不影响实验的话，则可能
